Féreglyukú injekciós disznó, Kefalgin filmtabletta

Vírusvektorok Absztrakt A génterápia lehetőséget nyújt a hasnyálmirigy betegség kezelésére cisztás féreglyukú injekciós disznó CFamit a CF transzmembrán vezetőképesség-szabályozó CFTR gén mutációi okoznak; azonban a hasnyálmirigybe való átjutás emberben nem tesztelt. A hasnyálmirigy-betegség fenotípusa nagyon hasonló az emberek és a sertések között CF-sel; így a CF sertések kiváló lehetőséget biztosítanak a hasnyálmirigybe történő génátvitel tanulmányozására.

Nincsenek tanulmányok a sertés hasnyálmirigy hatékony transzdukciójára génátvivő vektorokkal. Célunk egy biztonságos és hatékony módszer kidolgozása vad típusú WT sertés hasnyálmirigy-csatornák transzdukciójára, amelyek CFTR-t expresszálnak. A WT újszülött sertések köldök artériáját katétereztük, és adenoceptoros vírus-szerotípusú 9-es vektorot adtunk ki, amely a fluoreszcens fehérjét AAV9CMV.

Ez a technika stabil és dózisfüggő transzformációt eredményezett Féreglyukú injekciós disznó expresszáló hasnyálmirigy-csatorna epitheliális sejtekben. A celiakia artériája az újszülöttek köldök artériáján keresztül érhető el, és idősebb korokban a combcsont artériáján keresztül - az emberre fordítható szállítási megközelítések. Az 1, 2 CFTR-et számos epiteliális sejtben expresszáljuk, beleértve a hasnyálmirigy-csatornákat is, és apikális membrán-anioncsatornaként funkcionál.

Ezekben az egyénekben a károsodás a születés után is folytatódik, és fiatal korukban hasnyálmirigy-elégtelenné válnak. Jelenleg a CF-ben a hasnyálmirigy-betegség előrehaladásának megelőzésére nincsenek kezelések. A CF hasnyálmirigy-betegség terápiájának megtervezése kihívást jelentett, mert a hasnyálmirigy nem könnyen hozzáférhető emberben, és az egérmodellek nem fejtenek ki CF-re jellemző hasnyálmirigy-betegséget. Eddig nincsenek tanulmányok hpv vírus és sejtváltozások sertés hasnyálmirigy transzdukciójára vonatkozóan.

Az egerek és patkányok hasnyálmirigyében a sejtek transzdukciójára rendelkezésre álló technikák közvetlen hasnyálmirigy injekció, retrográd hasnyálmirigy-csőbevezetés vagy szisztémás adagolás a portális véna, a máj artériája, az epe-cső ideiglenes behatolásával invazívak, súlyos hasnyálmirigy-gyulladást és toxicitást okoznak, és nem kívánatos az emberi vizsgálatokhoz.

Általában a hasnyálmirigybe történő adenovírus-vektor irányított génátvitelt gyulladás és átmeneti féreglyukú injekciós disznó korlátozta. Ezenkívül a beadási módszerek általában invazívak, és főleg az egerek acináris sejtjeit és szigeteit, 30, 32, 33, 34, 40, 41, nem a hasnyálmirigy-csatorna epiteliális sejteket, amelyekben a CFTR expresszálódik.

Ennek a munkának a célja a vad típusú WT sertések hasnyálmirigycsatorna epitheliális sejtjeinek gének expresszálása és a CFTR génszállítás CF-géncsatornákba történő továbbításának jövőbeli tanulmányozása. AAV9 vektor a Celiac artérián keresztül, az edény, amely a hasnyálmirigy fő ágait táplálja, hatékonyan és stabilan transzdukált hasnyálmirigy-csatorna epitheliális sejtek.

Fekete Tır Testvériség 4

Ez az első tanulmány a transzgének expresszióját mutatja a sertés hasnyálmirigy csöves sejtjeiben. Eredmények Az AAV9 vektor IV injekciója nem transzdukálja a hasnyálmirigyet sertésekben Célunk a hasnyálmirigy és elsősorban a CFTR-t expresszáló hasnyálmirigycsatorna epithelialis sejtek célba juttatása hatékony és minimálisan invazív technikával.

Sertéseket választottunk, mivel a CFTR-funkciójú CF-sertések hibás anionszállítást mutatnak, és megismételik a CF-ben szenvedő embereknél megfigyelt multiszisztémás betegséget, beleértve a hasnyálmirigy-betegséget.

Ezért a szisztémás vénás bejuttatás nem váltotta át a hasnyálmirigyet az féreglyukú injekciós disznó sertésekben. A celiakia artériája új módszerként alkalmazható a transzgének újszülött sertések hasnyálmirigybe történő szállítására Ezt követően a celiakia artériáján, az ember és a sertés hasnyálmirigyének jelentős ágait ellátó edényben értékeltük a vektort. Röviddel a születés után 24—48 óra a celiakis artéria könnyen elérhető a köldök artériákon keresztül 1.

Istenem, az elején nagyon kemény voltál, igazán az. Aztán minden átcsapott az ellenkezıjébe. Köszönetnyilvánítás Végtelen hálával a Fekete Tır Testvériség sorozat olvasóinak, és hangos üdvözlet a mobiltelefon használóinak — milyen kanapén ülünk most?

Az AAV9 vektort az újszülött sertések celiakia artériájára adtuk, és minden sertés komplikációk nélkül jól tolerálta az eljárást.

Az eljárás után a malacok helyreállták a szokásos ellátást. Celiac artériás katéterezés köldök artériákon keresztül.

Egy féregtől egy gyermek gyógyszeréig - Féregkészítmények sokféle ember számára

A katétert ezután a celiakia artériájába továbbítjuk. Vektor vagy vivőanyagot injektáltunk, és a katétert normál sóoldattal öblítettük. Teljes méretű kép Az AAV9 gén bejuttatása a celiakia artériáján nem okozott hasnyálmirigy gyulladást a sertésekben. Az adenovírus vektor irányított génátvitelét a hasnyálmirigybe korlátozza a rágcsálók gének gyulladása és átmeneti expressziója; 28, 29, 30, féreglyukú injekciós disznó azonban az AAV vektorok tipikusan alacsony immunogenitással rendelkeznek.

Annak megállapítására, hogy az AAV9 a sertésekben immunogén választ váltott ki, napi szinten figyeltük az aktivitásukat, az féreglyukú injekciós disznó és a súlygyarapodást. Nem találtunk különbséget a vektor és a hordozóval kezelt sertések között. Egy-három hónappal a vektor bejuttatása után az állatokat elpusztítottuk és a pancreata-t izoláltuk.

Megvizsgáltuk az AAV9-et született sertések hasnyálmirigy hisztológiáját, és ezt összehasonlítottuk a kontroll sertésekkel. A hasnyálmirigy normál architektúrája volt, a vektor bejuttatását követően nem volt infiltráló gyulladásos sejt 2. Az AAV9 génszállítás nem okoz hasnyálmirigy-gyulladást sertésekben.

Teljes méretű kép A GFP-t sertés hasnyálmirigy-csatorna epitheliális sejtekben fejezzük ki, miután az AAV9 vektort a celiakia artériájába juttatják. Bár az AAV-vektorokat más szervrendszerek célzására használják, korlátozott információ áll rendelkezésre a hasnyálmirigybe történő beadásukról. Annak megállapítására, hogy a GFP riporter gén kifejeződött-e a hasnyálmirigy csatornában az AAV9 vektornak az újszülött sertések celiakia artériájába történő bejuttatását követően, immunfluoreszcenciát IFimmunhisztokémiai IHC és fordított transzkripciós polimeráz láncreakció RT-PCR-t alkalmaztunk.

Kiegészítő ábra Az S1.

Férgek kezelése felnőttek fórumán, Férgek egy gyermek otthoni kezelési fórumán

Ábra az AAV9 vektort vagy vivőanyagot különböző dózisban kapott sertések IF képeit mutatja, és hónapig követte. Az AAV9 sertés duktális epiteliális sejteket transzdukál. Immunofluoreszcencia a, b és immunhisztokémiai c — f képek jelennek meg. A nyilak az intralobuláris nagyobb csatornákra mutatnak, a nyílhegyek az interkalált kisebb csatornákra mutatnak. A c és d, valamint az e és f panelek ugyanabból az állatból soros szakaszok, a primer antitestet d és f elhagyjuk.

Teljes méretű kép Egy hónappal az AAV9 vektornak a celiakia artériájába történő szállítása után a sertés hasnyálmirigy-csatornáiban GFP expressziót találtunk, beleértve az interkalált és intralobuláris csatornákat 3a. Ábra nem észleltünk festést, ami megerősítette, hogy az antitestfestés féreglyukú injekciós disznó a GFP-re. A hordozóval kezelt állatok nem immunreaktívak a GFP-re 3b. A gén expresszió dózisfüggő volt, és a kezelés után 3 hónapig tartott az utolsó időpontot vizsgáltuk 4.

Így az AAV9 vektornak az újszülött sertések celiakia artériájába történő bejuttatása hatékonyan átadja a hasnyálmirigy-csatorna epiteliális sejtjeit. Az AAV9 transzformálja a ductalis epithelialis sejtek idejét és dózisválaszát. Tíz véletlenszerű hasnyálmirigy mezőt 20 × nagyítás értékeltünk állatonként immunfluoreszcencia.

Körök: 1 hónap; Négyzetek: 3 hónap. Azok a szervek, amelyek artériás táplálékot kapnak a celiakia artériájából, vastag betűvel vannak ellátva. A gyomor és a nyombél, a szervek, amelyek a celiakia artériájából vérellátást kapnak, nem transzdukáltak. Teljes méretű kép Az újszülött sertések celiakia artériájába szállított AAV9 vektor CFTR-t expresszáló hasnyálmirigy-csatorna epithel féreglyukú injekciós disznó transzdukál A humán és féreglyukú injekciós disznó sertés mintákkal végzett vizsgálatok azt mutatták, hogy a CFTR a hasnyálmirigyben magas szinten expresszálódik, és a hasnyálmirigy-csatorna epitéliumára lokalizálódik.

Ezek az eredmények megerősítik, hogy technikánk a CFTR-t expresszáló csatorna sejteket transzferálja a hasnyálmirigyben. Teljes méretű kép Az AAV9 vektor hasnyálmirigy polipeptid-szekréciós sejteket transzdukál Az AAV9 transzformálja a p-sejteket és kisebb mértékben az α-sejteket egerekben; 32 azonban nem ismert, hogy a sertés hasnyálmirigy sejtjei érzékenyek-e az Emberi paraziták neve transzdukcióra.

A technikánkkal transzdukált hasnyálmirigy-altípusok vizsgálatához az amiláz elleni antitestekkel acináris sejtjelző 6b. Ábrainzulinnal β-sejtjelző 6c. Ábraglükagonnal α-sejtjelző immunizáltunk hasnyálmirigy-szakaszokat 6d. A kolokalizációt csak PP sejtekkel észleltük. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az AAV9 celiakia artériás injekciója nem transzdukálja a hasnyálmirigy acin sejtjeit, és csak a szigetek PP sejtjeit transzdukálja.

Az AAV9 vektort a celiakia artériájába más szerveket transzdukálja Mivel technikánk egy CMV citomegalovírus promoterrel rendelkező vektor szisztémás injekcióját tartalmazza, más szervek is transzdukálhatók. A celiakia a vért a gyomorba, a nyombélbe, a lépbe, a májba és az epehólyagba szállítja, és a vektor beléphet a szisztémás keringésbe és eljuthat más szervekhez.

A technikánk által transzdukált szerveket az 5b. A máj, az epehólyag, a cisztás légcsatorna és a lép vérellátást kap a celiakia artériájából, és technikánk által transzdukáltuk.

Érdekes módon, a szervek, amelyek a celiakia artériájából a vérellátást kapják, mint például a gyomor és a nyombél, nem transzdukáltak. Az egyéb szisztémás betegségek kezelésében előnyös lehet a CF-ben általában részt vevő egyéb szervek nyálmirigy, légcső, tüdő, vas deferens és ileum transzdukciója.

Vita Ebben a tanulmányban egy új, biztonságos és minimálisan invazív génszállító technikát írunk le, hogy hatékonyan expresszáljunk egy riportergént a sertések hasnyálmirigycsatorna epiteliális sejtjeiben.

Ez az első féreglyukú injekciós disznó, amely a sertés hasnyálmirigy hatékony transzdukcióját mutatja génátvivő vektorral. A hasnyálmirigy retroperitonealis szerv, és nehezen féreglyukú injekciós disznó.

Az egerek és patkányok hasnyálmirigyébe géneket szállító technikák magukban foglalják a hasnyálmirigy parenchima vagy a hasnyálmirigy-csatorna befecskendezését vagy a laparotomiával összefüggésben szisztematikusan adását, és a portális vénát, a máj artériát vagy az epe-csatornát. Technikánk egyik fő előnye, hogy könnyedén elvégezhető. Mivel a köldök artériája az újszülött sertéseknek a születés után 24—48 óráig szabadalmaztatható, lehetővé teszi az aorta, a celiakia és a hasnyálmirigy artériás táplálékhoz való könnyű, nem-invazív nem szükséges hozzáférést.

A belsõ artériás katéterezés általában emberben történik, és még a koraszülött, nagyon alacsony születési súlyú újszülöttek jól tolerálják.

Férgek orvosi fórum - Férgek kezelése felnőttek fórumán

Amint a köldökedények már nem érhetők el, a cöliakia artériát a femoralis artérián keresztül katéterezhetjük. Ezért módszereink képesek az emberre fordítani. Általában a vénás rendszerbe szállított vírusvektorok nem hatékonyan transzdukálják a hasnyálmirigyet. Valójában nem tapasztaltuk a hasnyálmirigy génexpresszióját a vektor IV beadását követően.

Technikánk kiküszöböli ezt a problémát, ha a vektort közvetlenül a hasnyálmirigy vérellátásába juttatja, minimálisan invazív megközelítéssel. A technikát az állatok jól tolerálják és hatékony transzgén expresszióhoz vezetnek 1 féreglyukú injekciós disznó 3 hónappal a szülés után. A gyulladás és az átmeneti transzgén expresszió volt a legnagyobb probléma az adenovírus vektorok a hasnyálmirigybe történő szállítása során. Korlátozott információ áll rendelkezésre az AAV vektorok hasnyálmirigybe juttatásáról.

A transzgén CFTR-el történő kollokalizálását szintén nem vizsgáltuk. Vizsgálataink igazolják, hogy az AAV 9-es szerotípus hatékony hasnyálmirigy-transzdukciós vektor. Nem vizsgáltuk a többi szerotípust.

Korábbi vizsgálatokban az egér hasnyálmirigybe történő AAV-bejuttatása az AIN-transzdukciót jelentette az acin sejtek és a szigetek főként β-sejtek30, 32, 33, 34, 40, 41 és nem a hasnyálmirigy-csatorna sejtek esetében, ahol a CFTR kifejeződik.

Egy új génátviteli módszer sertés hasnyálmirigy-csatorna epitheliális sejtjeit transzdukálja

A transzgének CFTR-t expresszáló hasnyálmirigy-csatornákra való szállítása egy új és izgalmas eredmény a tanulmányban. Ezenkívül ezt a megközelítést alkalmazhatjuk olyan gének megcélozására, amelyek a hasnyálmirigy ductalis adenokarcinóma es sejtproliferációját és túlélését szabályozzák, vagy alkalmazhatók más hasnyálmirigy genetikai vagy a tisztább méregtelenítő vs szuper vastagbél tisztít betegségeire.

A vizsgálat másik érdekes eredménye a transzgének expressziója a hasnyálmirigy polipeptidet expresszáló sejtekben. Míg a PP pontos fiziológiai szerepét nem határozzuk meg, a hormon szintje a Féreglyukú injekciós disznó szenvedő és a krónikus pancreatitisben másodlagos diabéteszben szenvedő betegeknél csökken. Nem ismert, hogy a PP szerepet játszik-e a CF-hez kapcsolódó cukorbetegségben. Tanulmányunk egyik korlátozása a transzgének széleskörű expressziója más szervekben.

A vektor valószínűleg eléri a más szerveket a szisztémás vénás keringésben. Érdekes, hogy míg a gyomor és a nyombél a vérkeringést kapja a celiakia artériájából, nem transzdukáltak, ami arra utal, hogy más tényezők, például az AAV9 receptor által közvetített felvétel is szerepet játszhat.

Technikánk előnyös lehet olyan szisztémás betegség esetében, mint a CF, amely több szervet tartalmaz. A jövőbeni vizsgálatok esetében a hasnyálmirigyre specifikusabb promóter azaz pdx1 58 célzottabb expressziót eredményezhet. Összefoglalva, új, hatékony és jól tolerált génszállító technikát jelentünk egy nagy állatfaj hasnyálmirigy-csatorna epitheliális sejtjeinek, amelyek rendelkeznek CF-modellel.

A jövőbeni vizsgálatok feltárják ennek a technikának a hasznosságát a CFTR funkció helyreállításához, az anionszállításhoz és a hasnyálmirigy betegség progressziójának megelőzéséhez a CF sertésekben.

A CF-sertésekben a génterápia sikeres végrehajtása fontos lépést jelentene a CF-szel végzett transzlációs vizsgálatok felé. Kiegészítő információk.